»
S
I
D
E
B
A
R
«
primer (ดีเอ็นเอสายเดี่ยวสายสั้นๆ) มีความสำคัญต่อการเพิ่มปริมาณดีเอ็นเอในหลอดทดลอง
Sep 20th, 2012 by tipparat 88 views

primer ถูกสังเคราะห์เพื่อนำไปใช้ในการเพิ่มปริมาณดีเอ็นเอในหลอดทดลอง (PCR) การทำ PCR เริ่มจากการเตรียมปฏิกิริยาในหลอดทดลองให้ประกอบด้วยดีเอ็นเอตั้งต้น (ดีเอ็นเอ 2 สายจับกัน) primer 2 สาย DNA polymerase (เอนไซม์ที่พบในเซลล์ของสิ่งมีชีวิตทำหน้าที่สร้างดีเอ็นเอสายใหม่ต่อจาก primer โดยการคัดลอกจากดีเอ็นเอตั้งต้น) dNTPs (deoxynucleotide triphosphates เป็นหน่วยย่อยของดีเอ็นเอนำไปต่อโดย DNA polymerase เพื่อสร้างดีเอ็นเอสายใหม่) หลังจากนั้นปฏิกิริยาถูกควบคุมอุณหภูมิและเวลาเป็นรอบๆ โดยใช้เครื่องควบคุมอัตโนมัติ โดยแต่ละรอบเริ่มจากควบคุมอุณหภูมิและเวลาให้ดีเอ็นเอ 2 สายที่จับกันแยกออกจากกันเป็นดีเอ็นเอสายเดี่ยว 2 สาย แล้วควบคุมอุณหภูมิและเวลาให้ primer แต่ละสายจับกับดีเอ็นเอสายเดี่ยว แล้วควบคุมอุณหภูมิและเวลาอีกครั้งให้ DNA polymerase สร้างดีเอ็นเอสายใหม่ต่อจาก primer ดังนั้นเมื่อผ่านรอบแรกดีเอ็นเอเพิ่มขึ้น 2 เท่า และเมื่อเข้ารอบสองดีเอ็นเอที่เพิ่มขึ้น 2 เท่าในรอบแรกจะกลายเป็นดีเอ็นเอตั้งต้นของรอบสอง ทำให้เมื่อควบคุมอุณหภูมิและเวลาหลายๆ รอบดีเอ็นเอจะเพิ่มขึ้น 2 ยกกำลัง n เท่า เมื่อ n คือ จำนวนรอบ เนื่องจากใช้เวลาเพียงไม่กี่นาทีในแต่ละรอบ ทำให้เมื่อผ่านไปเป็นชั่วโมง ดีเอ็นเอจะเพิ่มขึ้นมากมายเพียงพอต่อการนำไปศึกษา ดังนั้น primer ช่วยให้การเพิ่มปริมาณดีเอ็นเอในหลอดทดลองประสบผลสำเร็จ

ที่มา : สุรินทร์ ปิยะโชคณากุล. “เอนไซม์ที่ใช้ในการโคลนยีน” ในพันธุวิศวกรรมเบื้องต้น. หน้า 42-65. กรุงเทพฯ : สำนักพิมพ์มหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์, 2545.

Share
เอนไซม์ DNA polymerase มีความสำคัญในการเพิ่มปริมาณดีเอ็นเอในหลอดทดลอง
Sep 18th, 2012 by tipparat 214 views

เอนไซม์ DNA polymerase เป็นเอนไซม์ที่พบในเซลล์สิ่งมีชีวิตทำหน้าที่สร้างดีเอ็นเอสายใหม่ต่อจาก primer โดยการคัดลอกจากดีเอ็นเอต้นแบบ ด้วยหน้าที่นี้ DNA polymerase จึงถูกนำไปใช้ในการเพิ่มปริมาณดีเอ็นเอในหลอดทดลอง (Polymerase chain reaction (PCR)) การทำ PCR เริ่มจากเตรียมส่วนผสมในหลอดทดลองให้ประกอบด้วย ดีเอ็นเอต้นแบบ (ดีเอ็นเอ 2 สายจับกัน) primer 2 สาย (ดีเอ็นเอสายเดี่ยวสายสั้นๆ 2 สาย สามารถไปจับปลายของดีเอ็นเอต้นแบบแต่ละสาย) DNA polymerase  dNTPs (deoxynucleotide triphosphates เป็นหน่วยย่อยของดีเอ็นเอนำไปต่อโดย DNA polymerase เพื่อสร้างดีเอ็นเอสายใหม่) หลังจากนั้นนำส่วนผสมไปควบคุมอุณหภูมิและเวลาเป็นรอบๆ โดยใช้เครื่องควบคุมอัตโนมัติ โดยแต่ละรอบเริ่มจากควบคุมอุณหภูมิและเวลาให้ดีเอ็นเอ 2 สายที่จับกันแยกออกจากกันเป็นดีเอ็นเอสายเดี่ยว 2 สาย แล้วควบคุมอุณหภูมิและเวลาให้ primer แต่ละสายจับกับดีเอ็นเอสายเดี่ยว แล้วควบคุมอุณหภูมิและเวลาอีกครั้งให้ DNA polymerase สร้างดีเอ็นเอสายใหม่ต่อจาก primer ดังนั้นเมื่อผ่านรอบแรกดีเอ็นเอเพิ่มขึ้น 2 เท่า และเมื่อเข้ารอบสองดีเอ็นเอที่เพิ่มขึ้น 2 เท่าในรอบแรกจะกลายเป็นดีเอ็นเอต้นแบบของรอบสอง ทำให้เมื่อควบคุมอุณหภูมิและเวลาหลายๆ รอบดีเอ็นเอจะเพิ่มขึ้น 2 ยกกำลัง n เท่า เมื่อ n คือ จำนวนรอบ เนื่องจากใช้เวลาเพียงไม่กี่นาทีในแต่ละรอบ ทำให้เมื่อผ่านไปเป็นชั่วโมง ดีเอ็นเอจะเพิ่มขึ้นมากมายเพียงพอต่อการนำไปศึกษา

ที่มา : สุรินทร์ ปิยะโชคณากุล. “เอนไซม์ที่ใช้ในการโคลนยีน” ในพันธุวิศวกรรมเบื้องต้น. หน้า 42-65. กรุงเทพฯ : สำนักพิมพ์มหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์, 2545.

Share
PCR เทคนิคที่ง่ายแต่มีประสิทธิภาพสูงในการเพิ่มปริมาณดีเอ็นเอ
Jun 1st, 2012 by tipparat 73 views

แต่เดิมการเพิ่มปริมาณดีเอ็นเอจะใช้วิธีการส่งเข้าไปในเซลล์ของสิ่งมีชีวิตแล้วอาศัยกลไกที่เกิดขึ้นในเซลล์ในการเพิ่มปริมาณดีเอ็นเอ วิธีนี้ใช้เวลานานเป็นสัปดาห์กว่าจะได้ดีเอ็นเอเพิ่มขึ้นในปริมาณที่เพียงพอ ต่อมาเมื่อเทคนิค PCR หรือ Polymerase Chain Reaction พัฒนาขึ้น การศึกษาดีเอ็นเอง่ายขึ้น เนื่องจากเทคนิคนี้ทำได้ง่ายในหลอดทดลองและยังสามารถเพิ่มปริมาณดีเอ็นเอให้เพียงพอต่อการนำไปศึกษาโดยใช้เวลาไม่กี่ชั่วโมง

อ่านรายละเอียดเพิ่มเติม

Share
»  Substance: WordPress   »  Style: Ahren Ahimsa